Аналитическая биохимия / 2012


The Presentation inside:

Slide 0

Аналитическая биохимия / 2012 Лекция 1 Суть и принципы аналитической биохимии Валерий Зайцев, к.б.н. ВолгГМУ, кафедра биохимии Распространение и использование на условиях Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 3.0 Unported http://wiki.creativecommons.org/images/3/3a/Attribution_3.0_СС_BY-NC-SA_rus.pdf


Slide 1

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 2


Slide 2

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 3


Slide 3

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 4 Обнаружение, идентификация, определение Качественный анализ Что присутствует в образце? Определение химической подлинности (тождественности) компонентов пробы (аналитов) тому или иному химическому соединению (веществу) Количественный анализ Сколько чего именно присутствует в образце? Определение количества (содержания, концентрации) компонента пробы (аналита) в определенных числовых величинах. Для разработки протокола количественного анализа обычно сначала требуется провести более или менее полный качественный анализ образца (или типа образца). Также требуется знать с большей или меньшей полнотой свойства аналита, что позволяет разработать максимально чувствительные и специфичные (селективные) аналитические подходы. Инструментальный анализ


Slide 4

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 5


Slide 5

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 6


Slide 6

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 7


Slide 7

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 8


Slide 8

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 9 Композиционная сложность биологических проб 4 Примеры биологических образцов сложного состава Белки в моче Barrat e.a. CMAJ 2007; 177(4): 361-368 2004 г. – 295 экзосомальных белков Pisitkun e.a. PNAS 2004; 101(36): 13368-13373 Urinary Exosome Protein Database http://dir.nhlbi.nih.gov/papers/lkem/exosome/ 304 белка на начало 2010 года 1160 белков на настоящий момент 2006 г. – более 1500 белков мочи Adachi e.a. Genome Biology 2006; 7: R80


Slide 9

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 10 Композиционная сложность биологических проб 4 Эффект пробоподготовки и высокая биологическая вариабельность состава Белки в моче Roelofsen e.a. Proteome Sci. 2007; 5: 2 Биологическая вариабельность содержания метаболитов в плазме крови человека Анализ содержания 66 метаболитов Shurubor e.a. BMC Clin. Pathol. 2007; 7: 9


Slide 10

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 11 Малое или следовое содержание анализируемого вещества 5 Референтные диапазоны содержания компонентов в крови


Slide 11

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 12


Slide 12

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 13 1. Выбор цели эксперимента


Slide 13

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 14 2. Анализ знаний по проблеме


Slide 14

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 15 3. Выбор объекта и аналитической задачи


Slide 15

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 16 4. Выбор адекватного аналитического метода Принципы выбора Чувствительность Точность Повторяемость (сходимость) и воспроизводимость Специфичность и селективность Длительность и трудоемкость выполнения Стоимость проведения анализа (включая исходные и операционные затраты) Применимость для серийных анализов Применимость для образцов сложного состава


Slide 16

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 17 5. Выбор способа отбора и подготовки пробы Какой образец использовать? Способ сбора образца? Нужна пробоподготовка? Можно ли хранить? Как?


Slide 17

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 18 6. Планирование хода эксперимента Интерференция ? Проблема правильного выбора холостой пробы (образца сравнения). Что необходимо ? Адаптация выбранного метода анализа к условиям лаборатории Закупка недостающего оборудования, реактивов, расходных материалов Разработка рабочего протокола Раскладка потребности времени на проведение эксперимента Разработка способов оценки успешности аналитического эксперимента Рабочий протокол Должен включать подробно описанную последовательность всех операций и манипуляций в ходе подготовки к аналитическому эксперименту, его проведения и анализа полученных данных. НЕ ДОЛЖЕН ИЗМЕНЯТЬСЯ В ХОДЕ ЭКСПЕРИМЕНТОВ ПРОИЗВОЛЬНЫМ ОБРАЗОМ !!!


Slide 18

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 19 7. Подготовка к экспериментальным операциям Зависит от эксперимента, например Приготовление необходимых растворов, реагентов, стандартов и т.д. Оценка качества исходных образцов Предварительная (многоточесная) калибровка Контроль правильности/точности работы оборудования


Slide 19

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 20 8. Выполнение аналитического эксперимента


Slide 20

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 21 9. Анализ экспериментальных данных Оценка достоверности результатов ! Аналитические результаты без оценки их достоверности не могут быть признаны обоснованными и потому не имеют никакого смысла. Необходимые расчеты Не являясь собственно экспериментальными данными, конечные результаты обучно получаются после более или менее сложных математических расчетов. Статистический анализ Необходим как для ослабления воздействия случайных погрешностей на результаты анализа, так и для выявления систематических ошибок и для оценки достоверности результатов.


Slide 21

CC BY-NC-SA 3.0 2011, В.Зайцев 22 10. Формирование выводов и оценка успешности


×

HTML:





Ссылка: